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BCM-2502 Envoyée par : Étudiant(e) Biochimie Répondue par : Franck Gallardo 2007-10-07
Question
#447
dans le chapitre clonage moléculaire 2 (page 07) :
qu'elle est l'utilité d'une contre sélection du vecteur parental ?
qu'elle est la pertinence d'utiliser d'avoir des sites de restricition disposés dans des directions opposées ?
Réponse Bonjour,
Pour la production de banque d’ADN génomique dans des phages tu veux uniquement récupérer a la fin de ton expérience les phages qui contiennent un ADN étranger. Les expériences de clonage ne sont pas efficace a 100% (loin de la). Tu dois donc sélectionner les phages dit recombinants des phages dit sauvages. Le système Spi autorise cette sélection. Il existe d’autres méthodes comme par exemple le système blanc-bleu dans le cas de clonage de fragments dans des plasmides. Pour les sites de restrictions, la double digestion BamH1 EcoR1 produira des fragments qui ne peuvent plus se liguer ensemble (bam et Eco sont incompatible). Tu libéreras donc la portion centrale du phage et les 2 bras droit et gauches. Si les sites étaient dans le même sens tu pourrais avoir réappariemment des fragments (essaye de faire le dessin de la digestion en considérant les 2 cas sites opposé ou non et tu verras le résultat).


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