| Étudiants | Enseignants | Administrateurs | | Aide |
| Banque de Questions/réponses | Envoyer une question | L'équipe des tuteurs | Commentaires |

Espace Étudiants : Banque de Questions/réponses

 

Sélection actuelle : BCM-2502

Sélectionner :

Rechercher le mot : ou le # de Question :

Il y a 1 éléments répertoriés. 

Précédent | 1 | Suivant


BCM-2502 Envoyée par : Autre Répondue par : Franck Gallardo 2007-11-14
Question
#463
Bonjour
j'ai une question en biologie moléculaire.
en fait j'ai un plasmide et je veux integrer un duplexe d'ADN dans ce plasmide. mon duplexe contient les sites de restriction en 5' (SpeI) et en 3' (XhoI). quand je regarde mon plasmide j'ai seulement le site de SpeI et pas de site de XhoI. je me demande donc comment dois je faire pour itégrer mon duplexe dans cette situation? (en sachant qu'il n'y a pas de possibiliter de changer la séquence de duplexe) merci par avance
Réponse Salut,

Les 2 sites sont incompatibles, il va falloir trouver une autre methode.
1: tu fais une PCR sur ton fragment que tu veux cloner et dans les oligos de PCR tu rajoutes tes sites de restrictions Spe et Xho. Ton fragment aura alors quasi la meme taille avec tes 2 sites aux extremites. Pense a aujouter entre 6 et 8 nucleotides apres ton site de restriction pour faciliter la coupure. Tu clones ensuite ton fragment dans ton plasmide.
2: tu digere ton fragment et ton plasmide avec tes 2 enzymes, ensuite tu les "blunt" avec une DNA polymerase de ton choix. Tes deux fragments plasmide et insert sont alors a bout francs et tu les clones ensemble. Attention a l;orientation si tu les clones en blunt.

A bientot et bonne chance

Franck

Informations Question consultée 1942 fois. | 1459 votes, Moyenne 3/5.0 | À vous de voter => min max
Précédent | 1 | Suivant

| Accueil | | Banque de Questions/réponses | Envoyer une question | L'équipe des tuteurs | Commentaires |