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BCM-1501-A Envoyée par : daniela Répondue par : Etienne Lepage 2010-12-12
Question
#584
Bonjour, j'ai quelques questions concernant la partie Christian Baron

1) Je n'ai pas compris - le « PHOTOBLEACHING»

- FRET

- application de la GFP

- la technique «PATCH CLAMP»

Merci
Réponse Cette question est très large alors je vais devoir donner des réponses assez générals.

Photobleaching: C,est une technique par laquel on utilise un laser pour détruire une partie de lipides qui compose la membrane cellulaire. En marquant les lipide avec un composé fluorescent, il est alors possible de mesurer le temps nécessaire pour la cellule pour réparer le trou créé dans sa membrane. Ce test permet d'évaluer la fluidité membranaire. En effet, plus une membrane est fluide, plus rapidement elle pourra boucher le trou.

GFP: La GFP est une protéine fluorescente utilisée pour marquer des cellules ou des protéines. De cette façon, il est possible de localiser ce que l'on désire en l'excitant avec une lumière de longueur d'onde appropriée.

FRET: Technique utilisant les caractéristiques des protéines fluorescentes pour évaluer l'intéraction entre deux protéines. Brièvement, deux protéines d'intérets sont couplées à différentes protéines fluorescentes. Si les deux protéines intéragissent, lorsque l'on stimule à l'aide d'une lumière à une longeur d'onde particulière à l'une des protéines, on observera une fluorescence de la couleur de la deuxième protéine (du à un transfert d'énergie entre les protéines à cause de leur proximité). De cette façon, on sait que les deux protéines intéragissent.

Exemple: Protéine1 couplée à une protéine fluorescente bleu
Protéine 2 couplée à une protéine fluorescente jaune.
Si l'on stimule la protéine fluorescente bleu et que les deux protéines intéragissent on remarque l'émission d'une fluorescence jaune.
Si les deux protéines n'intéragissent pas, on observera une fluorescence bleu.

Patch Clamp: C'est une technique qui permet de vérifier le potentiel d'une membrane à faire traverser des ions. À l'aide d'électrode, il est ensuite possible de quantifier le passage d'ions à l'aide du potentiel électro-chimique généré.

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