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BCM-2501
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Envoyée par : Dominic Messervier
Répondue par : Alexandre Viau
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2004-04-14
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Question
#115
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Bonsoir,
J'aimerais savoir pourquoi le tamis moléculaire est souvent utilisé à la toute fin de la procédure de purification d'une protéine, après une colonne d'afinité par exemple...
L'examen est demain... |
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Réponse
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Le tamis moléculaire sert à séparer les protéines par leur taille. Étant donné qu'une colonne d'affinité est généralement plus spécifique que juste séparer selon la taille, elle va permettre d'augmenter rapidement le niveau de pureté de notre échantillon. Par la suite, nous nous serons débarrassé d'une bonne partie des contaminants.
Le tamis moléculaire est moins spécifique à notre protéine, mais il a un assez bon rendement (peu de perte). Il est donc utile d'ajouter cette technique à la toute fin de la procédure, car elle ne provoquera pas de perte majeure et on pourra se débarasser des contaminants qui étaient beaucoup plus gros ou beaucoup plus petit que notre protéine.
Le principe de base de toutes les purifications séquentielles de protéines est d'utiliser une série de méthode qui se basent sur des propriétés biochimiques complètement différente afin d'augmenter le niveau de pureté.
Par exemple, si j'utilise juste une colonne échangeuse d'ions, il se peut que plusieurs protéines aient les mêmes propriétés de charges. Cependant si je la combine avec une colonne d'affinité et un tamis moléculaire, les chances que plusieurs protéines aient les mêmes profils d'élution sont plutôt réduites.
Bonne chance dans vos purifications!!!
Alex ;-)
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