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BCM-2501
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Envoyée par : Robert beausejour
Répondue par : Alexandre Viau
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2004-04-14
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Question
#117
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Bonsoir,
J'aimerais avoir un petit rappel sur la chromatographie hydrophobe, comment agit le gradient de sel sur les proteines lors de la séparation (élution des proteines dans la colonne)
merci!
Robert
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Réponse
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Les colonnes hydrophobes se basent sur le fait que des domaines hydrophobes ont tendance à vouloir fuir l'eau pour ne pas y être exposés. Les protéines vont donc avoir tendance à vouloir cacher leurs domaines hydrophobes (n'aiment pas l'eau) en interagissant avec la colonne (qui est hydrophobe). Afin de favoriser ces interactions, on utilise des sels tel le sulfate d'ammonium en forte concentration dans l'eau. Ces sels, par un effet similaire au salting-out, vont augmenter l'effet répulsif de l'eau sur les domaines hydrophobes des protéines et ainsi de favoriser les interactions avec la colonne.
Afin d'éluer les protéines, on fait diminuer graduellement la concentration de sel du tampon, afin de diminuer la force de répulsion de l'eau et ainsi affaiblir les interactions protéine/colonne.
Les concentrations de sels joue donc des rôles cruciaux dans les processus de purification de protéines, alors faîtes bien attention de ne pas oublier les dialyses lorsque nécessaires.
Je vous envoie vers un site sur les colonnes hydrophobes si vous avez encore des doutes...
http://ntri.tamuk.edu/fplc/hyd.html
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