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BCM-3514
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Envoyée par : Robert beausejour
Répondue par : Marie-Claude Sincennes
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2004-04-19
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Question
#132
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Bonjour,
Dans l'article portant sur MyoD, lors de la Chip avec la chromatine purifié et les Ab spécifique pour HADC1 p/caf, on présume que les HADC et P/caf sont présent dans cet échantillon.
Un petit rapel sur la méthode ChIP YUM YUM
Merci |
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Réponse
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La technique d'immunoprécipitation de la chromatine (ChIP) est bien expliquée au site internet suivant, trouvé sur google: www.bio.brandeis.edu/haberlab/jehsite/chip.html. Brièvement, cette technique est utilisée pour déterminer si une protéine donnée interagit avec une séquence spécifique d'ADN in vivo. Les protéines sont liées de façon covalente avec l'ADN (crosslinking), puis l'ADN est isolé et fragmenté. On immunoprécipite la chromatine avec des anticorps spécifiques pour la protéine étudiée. On sépare la protéine de l'ADN, et on utilise la technique de PCR pour déterminer si une séquence d'ADN donnée a été immunoprécipitée.
Dans l'article sur MyoD (PNAS 2003, 100, 1735-1739), on utilise la technique de ChIP sur des myoblastes différenciés ou non, alors effectivement, on présume que MyoD, les HDAC et P/CAF sont présents dans ces cellules. On amplifie l'ADN avec des amorces spécifiques du promoteur de la myogénine, pour déterminer si ces protéines lient le promoteur.
Voici la méthode de ChIP, YUM YUM!!!
Site Internet à visiter#1
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