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BCM-2502
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Envoyée par : Iman Rafei
Répondue par : Marie-Claude Sincennes
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2004-10-20
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Question
#168
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bonjour,
j'aurais une autre question, je ne comprends pas tout à fait le processus de l'amorce utilisée pour un clonage directionnel d'ADNc. À quoi ca a servit exactement d'ajouter des linkers et une sequence d'XBA si on les a coupé par après.
merci à l'avance |
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Réponse
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Dans un clonage directionnel, on veut utiliser deux enzymes de restrictions différentes pour conserver l'orientation de l'insert une fois dans le vecteur. Si on utilise la même enzyme de restriction et qu'on l'insère dans le vecteur, alors à ce moment-là l'insert pourra être dans une orientation ou l'autre. Puisque l'insert au départ ne contient pas de site de restriction à ses extrémités, il faut en ajouter par les linkers. Après on peut utiliser ces sites de restriction pour effectuer le clonage, en les digérant. Si tu remarques dans le dessin, on n'a pas enlevé les linkers, on les a seulement digérés, mais une partie y est demeurée, de là son utilité.
J'espère que je t'ai éclairé un peu!
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