Envoyé par : Josée Frappier
Répondu par : Marie-Claude Sincennes
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2004-10-18 |
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Comment procède-t-on à partir d'une banque d'expression(contenant des ADNc contenus dans des vecteurs) pour d'obtenir des protéines isolées afin d'utiliser un anticorps comme sonde?
Diapo 18 document 1 Sylvie mader |
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Ceci répond à la situation où la seule information disponible sur l’ADNc qu’on veut cloner est la protéine correspondante, contre laquelle un anticorps a été obtenu par exemple apres purification. La réponse est que c’est essentiellement comme pour une banque d’ADN, il faut transférer les colonies bactériennes des boites de pétri sur filtre et les lyser pour rendre les protéines accessibles à la détection par l’anticorps. S’il s’agit de phages, la lyse des bactéries est déjà effectuée par le phage. La détection des bonnes protéines se fait parmi le mélange de protéines bactériennes comme dans un Western blot, avec l’anticorps spécifique contre la protéine désirée. Il faut que l’anticorps soit de bonne qualité pour avoir un bruit de fond faible par dessus lequel le signal spécifique pourra être détecté |
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