Envoyé par : zako
Répondu par : Franck Gallardo
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2007-10-27 |
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Technique de foot printing c'est quoi |
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Bonjour,
Le principe du footprinting repose sur la capacité qu’ont les protéines à se fixer sur l’ADN. Tu marques tes fragments d’ADN d’intérêt avec un groupement phosphate radioactif et tu réalises une digestion partielle avec une DNAse (ex : DNAseI). Tu réalises cette expérience sans extrait protéique qui te sert de contrôle et avec un extrait protéique ou une protéine purifiée qui constitue ton foot printing. Si une protéine est capable de se fixer sur ta séquence d’ADN, elle va le protéger de la dégradation. En comparant les différents fragments obtenus après migration sur gel tu pourras alors savoir si une protéine est capable de se fixer sur l’ADN (voir dessin). Des expériences de retard sur gel sont également utilisées pour savoir si une protéine se fixe sur un acide nucléique. Le footprinting a plusieurs limites : tu n’as aucunes applications fonctionnelles, même si la protéine se fixe tu ne sais pas si elle est active, de plus tu ne sais pas si cette interaction se produit in vivo. C’est pourquoi des techniques d’immunoprécipitation de chromatine ont été développées. Référence : http://www.icampus.ucl.ac.be/courses/SBIM2520/document/genemol/administration/etudiants/FOOTP/footprinting.html  |
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