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BCM-2501
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Envoyée par : Fidaa Al-Shakfa
Répondue par : Alexandre Viau
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2005-03-07
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Question
#244
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Bonjour,
Pouvez-vous me citer les étapes caractérisant les extractions des protéines intracellulaires, extracellulaires et membranaires.
(l'examen est ce mardi)
merci. |
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Réponse
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Bonjour,
Comme vous pouvez le voir aux pages 64 à 66 dans les notes du Dr Rokeach, il y a principalement deux étapes communes à toute purification de protéines.
La première, les techniques de séparation primaires, vous permettent d'obtenir des fractionnements des différents compartiments de la cellule et/ou de solubiliser la protéine d'intérêt. Ce sont ces techniques qui diffèrent selon la localisation naturelle de la protéine dans la cellule.
Une fois les techniques de séparation primaire terminées, il reste l'étape de la purification par chromatographie, qui comprend plusieurs types de techniques et qui se ressemble beaucoup, peut importe la localisation initiale de votre protéine dans la cellule.
Donc, selon le lieu où se trouve votre protéine d'intérêt, ce sont les étapes de séparation primaire qui vont principalement changer. Sans entrer dans les détails déjà disponibles dans les notes de cours, disons qu'une protéine extracellulaire nécessite moins d'étapes primaires puisqu'elle est sécrétée à l'extérieur de la cellule, tandis qu’une protéine intracellulaire aura besoin de plus d'étapes de fractionnement. Bien que ces étapes puissent sembler longues et source de perte importante, elles permettent bien souvent d'augmenter la concentration relative initiale de la protéine, surtout dans le cas où celle-ci se trouve dans un compartiment spécifique comme les lysosomes par exemple. En effet, en obtenant une fraction presque pure de lysosomes, nous nous débarrassons de la plupart des autres compartiments cellulaires qui contiennent des protéines qui pourraient augmenter le bruit de fond.
Pour ce qui est des étapes de chromatographie, elles restent sensiblement les mêmes et pour l'examen essayez de rester logique et de ne pas oublier les étapes intermédiaires comme la dialyse par exemple et tout devrait bien aller.
Alex
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